Посев и культивирование микроорганизмов

Посев микроорганизмов — это заражение микроорганизмами стерильной питательной среды.

Цель посева — выделение микроорганизмов из исследуемого материала, получение чистых культур и изучение их свойств. Первичный посев чаще производят из объектов внешней среды, патологического материала. В качестве патматериала берут и посылают в ветеринарную лабораторию паренхиматозные органы (печень, селезёнку, почки, легкие), отрезок тонкой или толстой кишки, желудок с содержимым, сердце, трубчатую кость, кровь, мочу, фекалии, выделения из влагалища, носовой полости и т. д.

Пересев — это перенос ранее выделенных микроорганизмов из одной среды на новую, стерильную ПС.

Цель пересева — получение чистой культуры микроорганизмов, изучение её биологических свойств. Техника и условия посева и пересева одинаковы.

Условия посева и пересева:

  1. Вся работа проводится в специальных помещениях — боксах, где воздух стерилизуют с помощью ртутно-кварцевых ламп.
  2. Работают в специальной одежде: халат, шапочка, резиновые перчатки, ватно-марлевая повязка (респиратор).
  3. Работа проводится у пламени спиртовки.
  4. В работе используют стерильный инструмент, посуду, ПС.
  5. Во время работы нельзя отвлекаться, разговаривать, кашлять, чихать.
  6. Весь отработанный (ненужный) материал, посуду, инструмент, рабочее место, руки, одежду по окончании работы дезинфицируют.
  7. Соблюдается основное правило при работе с микроорганизмами — не загрязнять окружающую среду микробами из исследуемого материала и не допускать загрязнения исследуемого материала микробами из внешней среды.

Культивирование

Это выращивание микробов на ПС. Цель – получение микробной массы, изучение биологических свойств микробов.

Условия культивирования:

  1. Соответствие ПС питательным потребностям микроорганизмов (рН, набор и оптимальное соотношение питательных веществ).
  2. Соответствие концентрации О2 потребностям микроорганизмов, которые по отношению к О2 делятся:

— облигатные аэробы, которые нуждаются в О2;

— облигатные анаэробы, которые не нуждаются в О2 (кислород подав-ляет размножение таких микроорганизмов);

— факультативные анаэробы, растущие при О2 и без О2.

Для выращивания анаэробных микробов создают анаэробные условия, которые достигаются несколькими способами (в основном тремя):

— физические методы основаны на разобщении ПС от О2, с этой целью используют микроанаэростаты, эксикаторы, глубокие посевы в ППС, ПЖПС, отделение ПС от воздуха слоем индифферентного масла (среда Китт-Тароцци);

— химические методы — используют вещества, которые вступают в реак-ции с поглощением О2 (горение свечи в эксикаторе, пирагаллол + гидроокись натрия, гидросульфит натрия + гидрокарбонат натрия);

— биологические методы — на ППС в чашки Петри высевают аэробные и анаэробные микроорганизмы и помещают в эксикатор. При термостатировании вначале размножаются аэробы, которые поглощают кислород, а затем – анаэробные микроорганизмы.

Оптимальная температура

Микроорганизмы могут расти при мини-мальной, оптимальной и максимальной температурах. По отношению к температуре, при которой растут микробы их делят на 3 группы:

— психрофилы (холодолюбивые) — растут при температуре от 0оС до 35оС (это возбудители болезней рыб; микробы, разлагающие корма, продукты);

— мезофилы — микроорганизмы, растущие при температуре от 10оС до 45оС (к ним относятся возбудители болезней животных, насекомых, человека);

— термофилы (теплолюбивые микробы) растут при температуре от 35оС до 75оС.

Для создания нужной температуры в лабораториях используют термостаты — специально сконструированные аппараты, где температура поддерживается автоматически.

Наличие или отсутствие света

Имеются светолюбивые микробы — фотобактерии (фотоавтотрофы, фотогетеротрофы), а также скотобактерии — не нуждающиеся в свете (хемоавтотрофы, хемогетеротрофы).

  1. Методы выделения чистых культур бактерий.
  2. Метод истощающего посева культуры на ППС (метод Дригальского). С помощью стерильной бактериальной петли берут смешанную культуру, наносят её на поверхность ППС в чашку Петри. Бактериальной петлёй или шпателем распределяют культуру по поверхности плотной среды первой, а затем второй и третьей чашки. После выращивания в термостате на последних чашках вырастают отдельные колонии микроорганизмов, из отдельной колонии выделяют чистую культуру микроба, представляющую один вид микроба.
  3. Метод последовательных разведений. Цель — уменьшить концентрацию микробов в посевном материале. Для этого берут ряд стерильных пробирок, содержащих по 9 см3 физиологического раствора (количество пробирок зависит от концентрации культуры). В первую пробирку вносят 1 см3 культуры, а затем делают последовательные 10-кратные разведения. Для посева на ППС используют обычно две последние пробирки. Из отдельно выросшей колонии выделяют чистую культуру микроба.
  4. Посев культуры на ингибиторные среды. Ингибиторы подавляют рост чувствительных к ним микробов, а нечувствительные микробы на этих средах вырастают.
  5. Для выделения кислото-спирто-щёлочеустойчивых микробов (напри-мер, возбудитель туберкулёза) культуру обрабатывают слабыми растворами кислот или щелочей, а затем высевают на ППС, где после термостатирования из колонии берут чистую культуру.
  6. Прогрев материала для выделения споровых форм микробов. Вегетативные формы погибают, а споровые остаются после их роста в виде отдельных колоний на ППС.
  7. Заражение чувствительных лабораторных животных. Животные погибают, из их органов и тканей делают посев на ППС, откуда выделяют чистую культуру микроба.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *